Токсикологическая характеристика нового препарата для ситуационной коррекции поведенческих отклонений у кошек и собак Экспресс Успокоин таблетки
В.А. Оробец1, доктор ветеринарных наук, профессор, зав. каф. терапии и фармакологии;
Д. В. Белоглазов2, кандидат биологических наук, научный консультант (beloglazovdv@mail.ru);
С. В. Мукасеев2, кандидат ветеринарных наук, ведущий ветеринарный врач (mukaseev@aspect-ag.com);
О. А. Зейналов3, кандидат биологических наук, главный специалист по науке.
1 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Ставропольский государственный аграрный университет (355017, РФ, г. Ставрополь, пер. Зоотехнический 12).
2 ООО «АГ «Аспект» (117246, г. Москва, Научный проезд д. 20 стр. 3, пом. 6).
3 ООО «НПК «СКиФФ» (117246, г. Москва, Научный проезд д. 20, стр. 3, эт. 2, пом. 204).
Тразодон — селективный антагонист и ингибитор обратного захвата серотонина, использующийся в медицине для лечения тревоги. Проведены токсикологические исследования сукцината тразодона на базе кафедры фармакологии ветеринарного факультета CтГАУ.
Результаты, полученные при исследовании острой токсичности препарата Экспресс Успокоин таблетки, позволяют определить новый препарат как относящийся к умеренно опасным для млекопитающих веществам (III класс опасности в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76).
При изучении субхронической токсичности препарата на крысах установлено, что его применение в течение 90 суток в дозах в 10…50 раз превышающих терапевтическую не вызывает изменений в клиническом состоянии подопытных крыс.
Совокупность полученных экспериментальных данных однозначно подтверждает хорошую переносимость препарата Экспресс Успокоин таблетки.
В результате токсикологических исследований установлено, что препарат не проявляет раздражающего и аллергизирующего действия.
Ключевые слова: тразодон, токсичность, седативный эффект, янтарная кислота, сукцинат, аллергизирующее действие.
Сокращения: АлАТ – аланинаминотрансфераза, АсАТ – аспартатами нотрансфераза, Гамма ГТ – гамма-глютамилтранспептидаза, ДВ – действующее вещество, МПД – максимальная переносимая доза, МТ – масса тела, НРДТК – непрямая реакция дегрануляции тучных клеток, ЩФ – щелочная фосфатаза, HGB – hemoglobin (гемоглобин), HCT – hematocrit (гематокрит), MCH – mean cell hemoglobin (среднее содержание гемоглобина в эритроците), MCHC – mean cell hemoglobin concentration (средняя концентрация гемоглобина в эритроците), MCV – mean cell volume (средний объем эритроцита), PLT – platelets (тромбоциты), RBC – red blood cells (эри троциты), WBC – white blood cells (лейкоциты)
Препарат разработан и выведен на рынок при финансовой поддержке Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере.
Введение
Тразодон – селективный антагонист и ингибитор обратного захвата серотонина [13], который с начала 70-х гг. используется в медицине как средство для лечения различных форм депрессий, сопровождающихся чувством тревоги [2].
Интерес ветеринарных врачей, вызванный возможностью применения тразодона гидрохлорида для модификации поведения животных-компаньонов в различных ситуациях, связанных со страхом, тревогой и стрессом был продиктован безусловной актуальностью данной проблематики, отсутствием эффективных и доступных средств медикаментозной коррекции, а также наличием данных, предполагающих корреляцию наблюдаемых у собак и кошек поведенческих аномалий с серотонином [11, 12, 15], модулятором которого является тразодон [4].
В отсутствие ветеринарных тразодон-содержащих лекарственных средств мелким домашним животным назначают рецептурные медицинские препараты, которые неудобны для дозирования (у кошек), имеют существенные недостатки, связанные с ереносимостью, и часто оказывают побочное действие – избыточный седативный эффект, вызывают вялость, апатию, сонливость и угнетение [8…10], продолжающиеся в течение 10…12 часов после однократного применения, а в отдельных случаях более суток [14]. Приведенные выше состояния, нарушающие нормальный ритм жизни питомца и его владельца, являются крайне нежелательными и опасными. Таким образом, становится очевидной причина, по которой за последние 50 лет в мире не было разработано коммерческих препаратов на основе гидрохлорида тразодона, лицензированных для применения животным-компаньонам.
Учитывая высокую актуальность проблематики поведенческих отклонений у собак и кошек, а также отсутствие эффективных и безопасных средств их фармакологической модификации, специалистами ООО НПК «СКиФФ» (Москва) разработан не имеющий аналогов на мировом ветеринарном рынке препарат для ситуационной коррекции девиантного поведения у животных-компаньонов – Экспресс Успокоин таблетки, содержащие в качестве активного фармацевтического ингредиента сукцината тразодона [5]. Использование сукцината тразодона в оптимальной дозе благодаря синергизму уникальных свойств соли янтарной кислоты и целевого действия тразодона обеспечило отсутствие побочных эффектов, характерных для медицинских препаратов на основе тразодона гидрохлорида, альтернативы которым до недавнего времени не было [1].
Технология создания новых фармакологических препаратов включает в себя обязательные многоплановые токсикологические исследования. В их программу, в частности, входит определение токсических доз и переносимости препарата модельными животными, выявление наиболее чувствительных к препарату органов и систем, характера и степени патологических изменений в них, а также обратимости вызываемых повреждений.
Цель исследования
Исследовать токсикологические параметры нового ветеринарного препарата Экспресс Успокоин таблетки на лабораторных животных.
Материалы и методы
Токсикологическую оценку препарата Экспресс Успокоин таблетки на лабораторных животных проводили в условиях вивария ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный аграрный университет» в соответствии с Приказом Министерства сельского хозяйства РФ [6], Руководством по проведению доклинических исследований новых фармакологических веществ и лекарственных средств [7] и ГОСТ 12.1.007-76 [3].
В опытах использовали модификацию препарата для собак средних и крупных пород, содержащую 120 мг сукцината тразодона и вспомогательные вещества.
Определение острой пероральной токсичности. Для проведения опыта было сформировано 6 групп (5 опытных и контрольная) беспородных белых мышей и 6 групп (5 опытных и контрольная) беспородных белых крыс, по 10 голов в каждой.
Препарат после суспендирования в 1%-м крахмальном геле вводили с помощью внутрижелудочного зонда в дозах 400, 800, 1600, 2000, 3000 мг/кг мышам и 1000, 2000, 3000, 4000, 4500 мг/кг крысам.
Период наблюдения за общим состоянием, поведением, приемом корма и воды, проявлением симптомов интоксикации, возможной гибелью лабораторных животных составлял 14 суток.
По результатам наблюдений рассчитали среднюю смертельную дозу (LD50) препарата методом пробит-анализа по Литчфилду и Уилкоксону.
1.Параметры острой пероральной токсичности препарата для мышей и крыс, мг/кг
| Вид животных | МПД | LD 16 | LD 50 | LD 84 | LD 100 | SLD 50 |
| Мыши | 400 | 900 | 1900 (1691,0…2109) | 2520 | 3330 | ±209,0 |
| Крысы | 1000 | 1900 | 3400 (3103,2…3696,8) | 4200 | 5350 | ±296,8 |
Определение хронической токсичности. В опыте использовал и 40 белых крыс, случайным образом разделенных на 3 опытных и 1 контрольную группы по 10 голов в каждой. Препарат вводили внутрижелудочно в дозах 1/10 LD50, 1/20 LD50 и 1/50 LD50 ежедневно, в течение 90 суток.
Необходимое количество препарата суспендировали в 1%-м крахмальном геле. В ходе исследования наблюдали за общим состоянием и поведением животных, реакцией на раздражители (звук, свет), проявлением симптомов интоксикации, возможной гибелью.
Через сутки после последнего введения препарата (91-е сутки от начала эксперимента) 5 животных из каждой группы подвергли эвтаназии и провели морфологическое и биохимическое исследование крови, патологоанатомическое вскрытие с макроскопическим описанием органов и тканей и определением массовых коэффициентов органов (печень, сердце, селезенка, легкие, почки).
Через 10 суток после последнего введения препарата (101-е сутки эксперимента) подвергли эвтаназии оставшихся в каждой группе крыс и провели аналогичные исследования для выявления обратимости процессов после хронического внутрижелудочного введения препарата. Статистическую обработку проводили по Стьюденту-Фишеру с использованием t-критерия.
Определение аллергизирующих свойств. Эксперимент проводили на 40 морских свинках, из которых были сформированы 3 опытных и 1 контрольная группы, по 10 животных в каждой.
Сначала в течение 30 дней проводили сенсибилизацию подопытных животных путем перорального введения 1%-й крахмальной суспензии препарата, содержащей в 1 мл 120 мг сукцината тразодона, в дозе 6 мг/голову. На 10-й, 15-й и 30-й день от начала сенсибилизации тестировали сенсибилизирующие свойства с помощью конъюнктивальной и назальной проб, а также НРДТК.
2. Динамика прироста массы тела в течение 90-дневного применения препарата
| Порядковый номер животного | Масса тела, г | |||||
| Контрольная группа | Опытные группы, доза сукцината тразодона, мг/кг | |||||
| 340 | 170 | 68 | ||||
| 0-е сутки | ||||||
| 1 | 170,8 | 172,2 | 170,4 | 173,2 | ||
| 2 | 175,3 | 173,4 | 175,3 | 170,1 | ||
| 3 | 175,1 | 175,5 | 173,7 | 175,6 | ||
| 4 | 173,3 | 173,1 | 173,5 | 171,0 | ||
| 5 | 176,6 | 173,8 | 173,3 | 170,3 | ||
| 6 | 175,4 | 172,3 | 174,1 | 173,5 | ||
| 7 | 172,8 | 172,1 | 174,3 | 173,9 | ||
| 8 | 172,1 | 174,3 | 170,5 | 172,1 | ||
| 9 | 175,1 | 173,1 | 175,1 | 174,2 | ||
| 10 | 174,3 | 173,7 | 172,6 | 174,6 | ||
| Среднее значение по группам | 174,08±1,78 | 173,35±0,05 | 173,28±1,69 | 172,85±1,88 | ||
| 30-е сутки | ||||||
| 1 | 180,1 | 181,1 | 179,5 | 183,1 | ||
| 2 | 184,4 | 181,6 | 187,8 | 183,6 | ||
| 3 | 184,3 | 185,2 | 186,2 | 184,3 | ||
| 4 | 183,7 | 184,8 | 183,1 | 180,2 | ||
| 5 | 184,0 | 184,0 | 182,6 | 182,9 | ||
| 6 | 186,1 | 183,2 | 183,8 | 184,6 | ||
| 7 | 184,5 | 182,5 | 183,3 | 183,1 | ||
| 8 | 183,3 | 186,7 | 180,1 | 184,0 | ||
| 9 | 186,0 | 182,3 | 186,0 | 186,2 | ||
| 10 | 185,5 | 185,8 | 183,5 | 185,3 | ||
| Среднее значение по группам | 184,19±1,71 | 183,72±1,87 | 183,59±2,59 | 183,73±1,62 | ||
| 45-е сутки | ||||||
| 1 | 182,2 | 182,2 | 182,6 | 184,4 | ||
| 2 | 185,5 | 182,4 | 188,7 | 184,8 | ||
| 3 | 185,1 | 186,3 | 187,2 | 185,5 | ||
| 4 | 184,2 | 185,7 | 185,4 | 183,5 | ||
| 5 | 185,5 | 185,3 | 183,4 | 184,9 | ||
| 6 | 187,2 | 184,2 | 184,3 | 186,8 | ||
| 7 | 185,2 | 183,7 | 183,6 | 186,6 | ||
| 8 | 184,1 | 187,8 | 184,4 | 182,3 | ||
| 9 | 186,1 | 183,2 | 187,6 | 188,4 | ||
| 10 | 186,2 | 186,1 | 184,6 | 189,5 | ||
| Среднее значение по группам | 185,13± 1,36 | 184,69±1,32 | 185,18±1,44 | 185,67±1,57 | ||
| 60-е сутки | ||||||
| 1 | 185,1 | 185,1 | 184,0 | 187,6 | ||
| 2 | 189,3 | 185,3 | 191,3 | 188,1 | ||
| 3 | 189,6 | 188,6 | 190,1 | 187,4 | ||
| 4 | 187,2 | 188,0 | 186,5 | 185,9 | ||
| 5 | 188,8 | 188,7 | 186,1 | 186,0 | ||
| 6 | 189,1 | 187,4 | 187,9 | 187,3 | ||
| 7 | 188,0 | 187,2 | 187,5 | 187,1 | ||
| 8 | 189,3 | 190,3 | 185,9 | 188,4 | ||
| 9 | 189,4 | 186,0 | 190,0 | 190,7 | ||
| 10 | 189,2 | 189,1 | 188,3 | 189,0 | ||
| Среднее значение по группам | 188,50±1,40 | 187,57±1,70 | 187,76±2,24 | 187,75±1,41 | ||
| 75-е сутки | ||||||
| 1 | 187,4 | 186,2 | 186,5 | 189,6 | ||
| 2 | 191,5 | 187,5 | 192,4 | 189,1 | ||
| 3 | 191,3 | 190,3 | 192,1 | 190,4 | ||
| 4 | 189,7 | 190,4 | 188,4 | 186,9 | ||
| 5 | 189,2 | 190,2 | 187,1 | 186,0 | ||
| 6 | 192,3 | 189,3 | 189,7 | 187,3 | ||
| 7 | 190,2 | 189,7 | 188,3 | 188,1 | ||
| 8 | 191,6 | 191,4 | 187,7 | 187,4 | ||
| 9 | 191,3 | 189,3 | 192,6 | 191,7 | ||
| 10 | 192,1 | 192,3 | 190,2 | 190,0 | ||
| Среднее значение по группам | 190,66±1,09 | 189,66±1,27 | 189,5±1,62 | 188,65±1,29 | ||
| 90-е сутки | ||||||
| 1 | 189,1 | 189,3 | 188,1 | 191,1 | ||
| 2 | 192,3 | 189,2 | 195,4 | 192,3 | ||
| 3 | 193,7 | 192,7 | 194,3 | 191,6 | ||
| 4 | 196,2 | 192,4 | 190,0 | 189,3 | ||
| 5 | 192,7 | 191,0 | 190,5 | 190,5 | ||
| 6 | 192,8 | 191,1 | 191,1 | 191,7 | ||
| 7 | 192,0 | 190,2 | 191,8 | 191,2 | ||
| 8 | 193,2 | 195,6 | 189,5 | 192,3 | ||
| 9 | 193,1 | 190,4 | 195,3 | 195,0 | ||
| 10 | 193,5 | 194,3 | 192,0 | 194,1 | ||
| Среднее значение по группам | 192,86±1,75 | 191,62±2,11 | 191,08±2,49 | 191,91±1,65 | ||
Для постановки конъюнктивальной пробы 1 каплю раствора препарата в дистиллированной воде (в соотношении 1:10) вводили глазной пипеткой с вытянутым тонким концом под верхнее веко морской свинке, во второй глаз (контрольный) инстиллировали 1 каплю дистиллированной воды.
Реакцию на введение препарата определяли через 15 мин (быстрая реакция) и через 24 часа (гиперчувствительность замедленного типа) и оценивали по следующей шкале (в баллах):
1 – легкое покраснение слезного протока;
2 – покраснение слезного протока и склеры в направлении к роговице;
3 – покраснение всей конъюнктивы и склеры.
При выполнении назальной пробы в одну половину носа закапывали 2 капли раствора препарата в дистиллированной воде (в соотношении 1:10).
Если через 10…20 мин после введения появлялись затрудненное дыхание, чихание, водянистые выделения, пробу считали положительной.
Для проведения НРДТК сначала получали перитонеальные тучные клетки крыс. Для этого животному после эвтаназии вводили внутрибрюшинно 5 мл подогретого до 37 ºC физиологического раствора и после легкого массажа брюшной стенки в течение 1…2 мин производили разрез до средней линии, затем переворачивали тушку разрезом вниз и собирали смыв, стекающий с петель кишечника в смоченную гепарином пробирку. Препараты готовили на обезжиренных предметных стеклах, окрашенных 0,3%-м спиртовым раствором нейтрального красного и высушенных при комнатной температуре, следующим образом: к 0,03 мл взвеси тучных клеток добавляли 0,03 мл сыворотки подопытного животного и 0,03 мл исследуемой лекарственной формы, покрывали покровным стеклом, края которого смазывали вазелином, затем инкубировали 15 мин в термостате при 37 ºC и исследовали под микроскопом при ×20. Результаты оценивали методом подсчета процента дегранулированных тучных клеток. Положительным считается тест, если процент дегранулированных клеток превышает 10.
3. Гематологические показатели через сутки после последнего введения препарата
| Показатели | Средние по группе значения показателей | ||||
| Контрольная группа | Опытные группы, доза сукцината тразодона, мг/кг | ||||
| 340 | 170 | 68 | |||
| RBC, •1012/л | 7,42±0,19 | 7,65±0,25 | 7,54±0,10 | 7,45±0,17 | |
| MCV, мкм3 | 53,2±0,78 | 54,9±0,69 | 53,4±0,44 | 53,8±0,43 | |
| MCH, пг | 18,7±0,41 | 18,6±0,41 | 18,6±0,23 | 18,7±0,26 | |
| MCHC, г/дл | 34,3±0,30 | 34,3±0,67 | 34,9±0,29 | 34,5±0,22 | |
| HGB, г/л | 131,4±2,22 | 129,7±5,11 | 129,3±1,80 | 128,5±1,79 | |
| HCT, % | 43,8±0,59 | 41,6±1,45 | 41,9±0,52 | 41,8±0,45 | |
| PLT, •109/л | 610,5±13,4 | 619,4±23,3 | 598,5±25,7 | 611,7±24,8 | |
| WBC, •109/л | 7,04±0,31 | 6,98±0,27 | 7,13±0,35 | 7,21±0,21 | |
| Лейкограмма | |||||
| Нейтрофилы, %: юные палочкоядерные сегментоядерные | 0 0,35±0,05 15,3±1,67 | 0 0,33±0,04 14,8±0,68 | 0 0,33±0,03 15,9±1,48 | 0 0,26±0,05 14,3±1,46 | |
| Базофилы, % | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| Эозинофилы, % | 2,31±0,28 | 2,45±0,31 | 2,46±0,31 | 2,30±0,43 | |
| Моноциты, % | 2,38±0,31 | 2,43±0,26 | 2,57±0,43 | 2,37±0,37 | |
| Лимфоциты, % | 79,5±1,73 | 80,8±1,47 | 79,1±1,56 | 80,0±1,5 | |
Результаты и обсуждение
Острая пероральная токсичность. Среднесмертельная доза препарата для белых мышей и крыс при внутрижелудочном введении составила 1900 и 3400 мг/кг, соответственно (табл. 1). На основании полученных данных был сделан вывод, что препарат Экспресс Успокоин таблетки в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 относится к III классу опасности – «Вещества умеренно опасные».
Хроническая пероральная токсичность. Длительное применение препарата во всех испытанных дозах не вызывало значимых изменений в клиническом состоянии белых крыс. Случаев летального исхода среди животных в ходе опыта не зарегистрировано; за период наблюдения у крыс, находящихся в опыте, не было выявлено расстройств пищеварения и мочеотделения.
4. Гематологические показатели через 10 суток после последнего введения препарата
| Показатели | Средние по группе значения показателей | |||
| Контрольная групп | Опытные группы, доза сукцината тразодона, мг/кг | |||
| 340 | 170 | 68 | ||
| RBC, •1012/л | 7,92±0,16 | 7,61±0,21 | 7,54±0,34 | 7,73±0,45 |
| MCV, мкм3 | 53,3±1,14 | 52,6±1,07 | 52,7±0,47 | 52,5±0,68 |
| MCH, пг | 17,4±0,47 | 17,8±0,35 | 17,5±0,58 | 17,5±0,42 |
| MCHC, г/дл | 32,7±0,38 | 31,5±0,49 | 31,5±0,51 | 31,6±0,31 |
| HGB, г/л | 129,5±1,41 | 128,3±1,33 | 129,3±5,19 | 129,1±1,89 |
| HCT, % | 40,5±0,35 | 39,7±0,41 | 40,9±0,72 | 40,4±0,35 |
| PLT, •109/л | 631,5±14,7 | 626,3±17,8 | 616,3±25,7 | 634,3±36,8 |
| WBC, •109/л | 7,25±0,23 | 7,39±0,5 | 7,15±0,31 | 6,95±0,21 |
| Лейкограмма | ||||
| Нейтрофилы, %: юные палочкоядерные сегментоядерные | 0 0,62±0,29 14,6±0,76 | 0 0,50±0,17 14,2±0,81 | 0 0,64±0,14 14,4±1,08 | 0 0,53±0,19 13,2±1,11 |
| Базофилы, % | 0 | 0 | 0 | 0 |
| Эозинофилы, % | 3,31±0,21 | 3,45±0,36 | 3,15±0,54 | 3,32±0,25 |
| Моноциты, % | 2,66±0,37 | 2,75±0,38 | 2,95±0,69 | 2,91±0,37 |
| Лимфоциты, % | 81,5±1,03 | 79,4±1,01 | 79,3±2,05 | 80,4±1,11 |
Поведенческие реакции, поедание корма и потребление воды, частота дыхания у всех животных опытных групп оставались в пределах нормы и не отличались от контроля. Животные охотно поедали корм, равномерно прибавляли в массе тела, при этом достоверных различий между подопытными и контрольными животными по показателю прироста массы тела не отмечено. Не выявлено также зависимости массы тела от дозы препарата (табл. 2).
При оценке влияния препарата на функциональное состояние центральной нервной системы было отмечено, что крысы сохраняли двигательную активность, сопоставимую с активностью контрольных животных, адекватно реагировали на внешние раздражители.
Результаты анализа периферической крови крыс через 1 день и через 10 дней после 90-дневного введения препарата показали, что количество эритроцитов, лейкоцитов и лейкограмма в испытуемом диапазоне доз существенно не изменялись во времени и флюктуировали в пределах контрольных величин (табл. 3, 4). Все незначительные изменения, обнаруженные в гематологической картине подопытных крыс, находились в референтном диапазоне.
По результатам биохимического анализа крови у животных из опытных групп также не было отмечено достоверных изменений по сравнению с аналогичными показателями у контрольных животных (табл. 5). В частности, не зарегистрировано сколько-нибудь существенных сдвигов в значениях показателей, характеризующих протеинсинтезирующую функцию печени (концентрации общего белка и альбумина), углеводный (глюкоза) и жировой (общие липиды, холестерин) обмен. Активность обеих аминотрансфераз претерпевала незначительные колебания, которые, однако, находились в пределах референтного интервала, что подтверждает отсутствие активации процессов цитолиза гепатоцитов. На основании полученных данных был сделан вывод, что препарат в испытанном диапазоне доз не оказывает отрицательного воздействия на основные звенья метаболизма животных.
5. Биохимические показатели крови через 1 и 10 суток после последнего применения препарата
| Показатели | Контрольная группа | |||
| Средние по группе значения показателей Опытные группы, доза сукцината тразодона, мг/кг | ||||
| 340 | 170 | 68 | ||
| Через 1 сутки после последнего введения | ||||
| Общий белок, г/л | 62,7±1,19 | 61,2±1,16 | 62,1±1,89 | 62,3±1,29 |
| Белковые фракции, г/л: Альбумины Глобулины: - α - β - γ |
37,0±1,07 8,92±0,31 7,34±0,38 8,91±0,74 |
36,8±1,05 8,84±0,29 7,28±0,34 8,63±0,87 |
37,1±2,21 8,28±0,15 7,46±0,48 8,62±0,65 |
36,6±1,21 8,34±0,35 7,43±,14 7,75±0,49 |
| АсАТ, Е/л | 128,3±15,1 | 126,3±14,2 | 119,3±10,2 | 117,2±10,3 |
| АлАТ, Е/л | 35,4±2,93 | 34,2±2,76 | 36,1±1,78 | 35,6±2,96 |
| ЩФ, Е/л | 86,0±4,19 | 85,8±4,24 | 92,1±6,15 | 87,8±5,61 |
| Гамма ГТ, Е/л | 1,24±0,26 | 1,15±0,29 | 1,05±0,31 | 1,12±0,57 |
| Мочевина, мМ/л | 7,77±0,33 | 7,50±0,46 | 7,42±0,24 | 6,71±0,54 |
| Креатинин, мкМ/л | 34,3±1,39 | 33,4±1,30 | 34,1±1,07 | 32,5±1,90 |
| Холестерин, мМ/л | 2,74±0,05 | 2,63±0,03 | 2,64±0,14 | 2,78±0,07 |
| Общие липиды, г/л | 1,94±0,09 | 1,96±0,09 | 1,93±0,11 | 1,94±0,04 |
| Глюкоза, мМ/л | 4,43±0,24 | 4,24±0,25 | 4,52±0,18 | 4,53±0,28 |
| Фосфор неорганический, мМ/л | 1,94±0,18 | 1,94±0,11 | 1,90±0,04 | 1,98±0,12 |
| Кальций, мМ/л | 2,81±0,17 | 2,73±0,17 | 2,87±0,17 | 2,81±0,26 |
| Через 10 суток после последнего введения | ||||
| Общий белок, г/л | 58,1±1,14 | 58,1±2,14 | 57,4±1,61 | 58,4±2,41 |
| Белковые фракции, г/л: Альбумины Глобулины - α - β - γ |
31,7±1,08 7,23±0,24 7,37±0,32 8,05±0,87 |
37,7±2,17 7,85±0,92 7,17±0,86 7,50±0,38 |
36,3±1,06 6,64±1,43 6,84±0,78 7,76±0,66 |
36,4±1,78 6,93±0,83 6,51±0,68 7,86±0,50 |
| АсАТ, Е/л | 138,3±12,4 | 139,6±9,84 | 127,8±11,2 | 132,6±8,02 |
| АлАТ, Е/л | 35,4±2,68 | 40,4±5,92 | 40,2±3,98 | 41,4±6,14 |
| ЩФ, Е/л | 109,8±4,51 | 104,6±11,8 | 110,4±7,95 | 102,8±8,07 |
| Гамма ГТ, Е/л | 1,54±0,26 | 1,54±0,14 | 1,55±0,47 | 1,51±0,22 |
| Мочевина, мМ/л | 6,25±0,38 | 6,86±0,48 | 6,47±0,59 | 6,71±0,36 |
| Креатинин, мкМ/л | 37,3±1,43 | 36,4±1,16 | 37,6±2,21 | 37,4±1,58 |
| Холестерин, мМ/л | 2,56±0,44 | 2,35±0,25 | 2,35±0,13 | 2,45±0,03 |
| Общие липиды, г/л | 2,33±0,31 | 2,17±0,12 | 2,06±0,25 | 2,14±0,14 |
| Глюкоза, мМ/л | 4,46±0,37 | 4,34±0,39 | 4,48±0,47 | 4,37±0,35 |
| Фосфор неорганический, мМ/л | 2,05±0,09 | 2,03±0,17 | 2,04±0,15 | 2,11±0,12 |
| Кальций, мМ/л | 2,56±0,12 | 2,44±0,23 | 2,52±0,18 | 2,37±0,33 |
По результатам макроскопического исследования органов животных опытных групп, проведенного после аутопсии, выполненной на 91-й и 101-й день эксперимента, различий в их состоянии и структуре у животных, длительно получавших препарат, и у крыс из контрольной группы обнаружено не было.
Об отсутствии значимых нарушении в состоянии внутренних органов крыс после многократного применения им препарата свидетельствуют также и результаты морфометрического анализа (табл. 6).
Таким образом, 90-дневное внутрижелудочное применение препарата крысам в указанном интервале доз не оказывает негативного влияния на поведенческие реакции животных и их общий вид, на показатели крови и основные физиологические функции организма, на морфологические показатели органов и тканей, что подтверждает хорошую переносимость препарата животными.
Аллергизирующие свойства. Результаты конъюнктивальной, назальной проб и НРДТК приведены далее.
Конъюнктивальная проба. Реакция сенсибилизированных морских свинок не отличалась от реакции контрольных животных: глазная щель не сужалась, не было зарегистрировано изменений сосудистого рисунка конъюнктивы или ее покраснения. При оценке состояния конъюнктивы, роговицы и век подопытных животных установлено, что препарат не вызывает раздражения или каких-либо иных нежелательных эффектов как сразу после инстилляции, так и на протяжении всего опыта.
Назальная проба. Закапывание сенсибилизированным и контрольным морским свинкам в носовые ходы исследуемого препарата на 10-е, 15-е и 30-е сутки не вызывало гиперемии слизистой оболочки, чихания и/или усиления секреции слизи. На основании этих данных тест оценили как отрицательный.
Реакция непрямой дегрануляции тучных клеток. Результаты НРДТК представлены в таблице 7. С учетом того, что процент дегранулированных тучных клеток в опытных группах был менее 10 %, ответ, полученный в НРДТК, является отрицательным.
6. Масса внутренних органов крыс через 1 и 10 суток после завершения введения препарата
| Орган | Масса, г | ||||
| Контрольная группа | Опытные группы, доза сукцината тразодона (мг/кг) | ||||
| 340 | 170 | 68 | |||
| Через 1 сутки после последнего введения | |||||
| Печень | 24,8±0,47 | 26,1±0,68 | 26,0±0,77 | 25,7±1,10 | |
| Почки | 5,23±0,22 | 5,31±0,22 | 5,34±0,16 | 5,56±0,15 | |
| Легкие | 3,61±0,15 | 3,76±0,15 | 3,81±0,14 | 3,48±0,28 | |
| Селезенка | 2,10±0,21 | 2,09±0,33 | 2,17±0,23 | 2,22±0,13 | |
| Сердце | 2,91±0,74 | 2,82±0,37 | 2,89±0,11 | 2,87±0,12 | |
| Через 10 суток после последнего введения | |||||
| Печень | 29,2±0,66 | 29,4±1,38 | 28,1±1,25 | 29,5±1,83 | |
| Почки | 6,12±0,12 | 6,02±0,48 | 5,88±0,37 | 5,78±0,38 | |
| Легкие | 3,97±0,31 | 3,67±0,51 | 3,69±0,43 | 3,59±0,67 | |
| Селезенка | 2,35±0,14 | 2,20±0,27 | 2,19±0,36 | 2,31±0,30 | |
| Сердце | 3,44±0,27 | 2,14±0,25 | 2,50±0,28 | 3,10±0,24 | |
7. Результаты реакции непрямой дегрануляции тучных клеток
| Длительность сенсибилизации, сутки | Доля дегранулированных тучных клеток, % | |
| Опытная группа | Контрольная группа | |
| 10 | 7,33±1,61 | 6,86±1,38 |
| 15 | 6,81±1,95 | 7,69±1,19 |
| 30 | 7,74±1,26 | 7,35±1,97 |
Заключение
Согласно результатам, полученным нами при исследовании острой токсичности препарата Экспресс Успокоин таблетки его средне-смертельная пероральная доза при внутрижелудочном введении мышам и крысам составляет, соответственно, 1900 мг/кг и 3400 мг/кг, что позволяет определить новый препарат как относящийся к умеренно опасным для млекопитающих веществам (III класс опасности в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76).
При изучении субхронической токсичности препарата на крысах установлено, что его применение в течение 90 суток в дозах 340 мг/кг, 170 мг/кг и 68 мг/кг, примерно в 10…50 раз превышающих терапевтическую, не вызывает сколько-нибудь значимых изменений в клиническом состоянии, а также в морфологической и биохимической картине крови подопытных крыс, которые в течение всего эксперимента соответствовали физиологическим нормам для данного вида животных.
У получавших препарат животных не было обнаружено и патоморфологических изменений. По результатам проведенных после аутопсии макроскопического исследования и морфометрического анализа внутренних органов, их размер и состояние у подопытных и контрольных крыс не имели достоверных различий по определяемым параметрам.
Таким образом, совокупность полученных экспериментальных данных однозначно подтверждает хорошую переносимость препарата Экспресс Успокоин таблетки.
В результате токсикологических исследований также установлено, что препарат не проявляет раздражающего и аллергизирующего действия на конъюнктиву глаза и слизистую оболочку носа при многократном применении и не вызывает дегрануляции тучных клеток крыс, выходящей за пределы нормы.
Таким образом, использование в препарате Экспресс Успокоин таблетки тразодона в форме сукцината, благодаря объединению в молекуле нового ДВ целевого действия тразодона с уникальными свойствами ЯК, позволило добиться отсутствия побочных эффектов, характерных для медицинских препаратов на основе гидрохлорида тразодона, альтернативы которым до недавнего времени не было. Высокая эффективность успокоительного действия нового препарата подтверждена клиническими исследованиями.
От других представленных на рынке препаратов для коррекции нежелательного поведения собак и кошек Экспресс Успокоин таблетки отличают хорошая переносимость животными разного возраста, быстрое начало действия при высокой эффективности успокоительного действия, отсутствие накопительного эффекта, синдрома отмены, а также развития толерантности при курсовом применении.
Принимая во внимание вышеизложенное, а также длительный (3 года) срок годности препарата, таблетки Экспресс Успокоин можно рекомендовать в ветеринарную аптечку практически каждому владельцу домашнего животного для ситуационного применения при необходимости быстрого устранения проявлений нежелательного поведения, связанного со страхом, тревогой и стрессом.
Конфликт интересов
Производителем препарата Экспресс Успокоин таблетки и спонсором данного исследования является ООО «НПК «СКиФФ». Решение о публикации результатов научной работы принадлежит разработчику ООО «НПК «СКиФФ».
References
1. 1. Beloglazov D.V., Mukaseev S.V., Zejnalov O.A., Trazodona sukcinat – novy`e vozmozhnosti bezopasnoj farmakologicheskoj korrekcii situacionny`x povedencheskix otklonenij u sobak i koshek [Trazodone succinate – new opportunities for safe pharmacological correction of situational behavioral abnormalities in dogs and cats], Izdanie, 2021, No. 04, pp. 05-13. (In russ.).
2. Burbello A.T., Shabrov A.V., Sovremenny`e lekarstvenny`e sredstva [Modern medicines], Moscow, 2007, 560 p. (In russ.).
3. GOST 12.1.007-76. Vredny`e veshhestva. Klassifikaciya i obshhie trebovaniya bezopasnosti [GOST 12.1.007-76. Harmful substances. Classification and general safety requirements] – introduced 01.01.77, Moscow, 1976. (In russ.).
4. Obosnovannoe primenenie antidepressantov: texnicheskij obzor danny`x, podgotovlenny`j Rabochej Gruppoj CINP [Reasonable use of antidepressants: a technical review of the data prepared by the CINP Working Group], Edited by T. Bagaj, X. Grunce, N. Sartorius: per. s angl., Saint Petersburg, 2006, 174 p. (In russ.)
5. Patent RF № 2706700C1, 20.11.2019. Farmacevticheskaya kompoziciya dlya korrekcii povedeniya koshek i sobak v stressovy`x situaciyax [Pharmaceutical composition for correcting the behavior of cats and dogs in stressful situations]. (In russ.).
6. Prikaz Ministerstva sel`skogo xozyajstva RF №101 ot 06.03.2018 g. «Ob utverzhdenii Pravil provedeniya doklinicheskogo issledovaniya lekarstvennogo sredstva dlya veterinarnogo primeneniya, klinicheskogo issledovaniya lekarstvennogo preparata dlya veterinarnogo primeneniya, issledovaniya bioe`kvivalentnosti lekarstvennogo preparata dlya veterinarnogo primeneniya» [Order of the Ministry of Agriculture of the Russian Federation No. 101 dated 06.03.2018 «On approval of the Rules for conducting a preclinical study of a medicinal product for veterinary use, a clinical study of a medicinal product for veterinary use, a bioequivalence study of a medicinal product for veterinary use»], available at https://fsvps.gov.ru/ (In russ.).
7. Rukovodstvo po provedeniyu doklinicheskix issledovanij lekarstvenny`x sredstv. Chast` pervaya [Guidelines for conducting preclinical studies of medicines. Part one], Mironov A.N., Bunatyan N. D. et al., Moscow, Grif i K, 2012, 944 p.
8. Gilbert-Gregory S.E., Stull J.W., Rice M.R., Herron M.E., Effects of trazodone on behavioral signs of stress in hospitalized dogs, J. Am. Vet. Med. Assoc., 2016, No. 249, pp. 1281-1291.
9. Gruen M.E., Roe S.C., Griffith E., Hamilton A., Sherman B.L., Use of trazodone to facilitate postsurgical confinement in dogs, J. Am. Vet. Med. Assoc., 2014, No. 245, pp. 296-301.
10. Jay A.R., Krotscheck U., Parsley E., Benson L., Kravitz,A. et al., Pharmacokinetics, bioavailability and hemodynamic effects of trazodone after intravenous and oral administration of a single dose to dogs, Am. J. Vet. Res., 2013, No. 74, pp 1450-1456.
11. Riva J., Bondiolotti, G. Micelazzi M. et al., Anxiety-related behavioral disorders and eurotransmitters in dogs, Appl. Anim. Behav. Sci., 2008, No. 114, pp. 168-181.
12. Sechi S., Di Cerbo A., Canello S., Guidetti G., Chiavolelli F., Fiore F., Cocco R., Effects in dogs with behavioral disorders of a commercial nutraceutical diet on stress and neuroendocrine parameters, The Vet. Rec., 2017, No. 180(1), pp. 18.
13. Stahl S.M., Mechanism of action of trazodone: A multifunctional drug. CNS Spectr., 2009. No. 14, pp. 536-546.
14. Understanding Trazodone Toxicosis, URL: ttps://www.aspcapro.org/resource/understanding-trazodone-toxicosis (date of application: 18.03.2021).
15. Vani J.L. Stress reducers for our feline friends URL: https://michvma.org/resources/Documents/MVC/2017 (date of application: 18.03.2021).
