Опубликовано: 12 декабря 2024 / Обновлено: 27 августа 2025
Просмотры: 2568
В.А. Оробец1, доктор ветеринарных наук, профессор, заведующий кафедрой терапии и фармакологии (orobets@yandex.ru);
О.И. Севостьянова1, кандидат биологических наук, доцент кафедры терапии и фармакологии (sevostyanova19@mail.ru);
Е.С. Кастарнова1, кандидат биологических наук, научный сотрудник кафедры терапии и фармакологии;
С.В. Мукасеев2, кандидат ветеринарных наук, ведущий ветеринарный врач (vet@astrafarm.com).
О.А. Зейналов2, кандидат биологических наук, главный специалист по науке.
11 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Ставропольский государственный аграрный университет (355017, РФ, г. Ставрополь, пер. Зоотехнический 12).
2 ООО «НВП «Астрафарм» (117246, г. Москва, Научный проезд, дом 20, стр. 3, этаж 3, пом. I, ком. 35).
В данной статье изложены результаты токсикологической оценки нового лекарственного препарата для ветеринарного применения Forsecto® на основе этофенпрокса и тебуфенпирада, который предназначен для борьбы с иксодовыми клещами, блохами, вшами и комарами у собак и кошек. LD50 Forsecto® при внутрижелудочном введении крысам составила 640 мг/кг, что согласно ГОСТ 12.1.007-76 позволяет отнести его к III классу опасности «Вещества умеренно опасные». Многократное накожное применение препарата в повышенных дозах не вызывает значимых изменений в клиническом состоянии белых крыс, не установлено его негативного влияния на основные физиологические функции биологической тест-системы, не зарегистрировано патоморфологических изменений. Оценка способности препарата при его введении в организм вызывать состояние гиперчувствительности не выявила у него аллергизирующего действия. Таким образом, лекарственный препарат Forsecto® не обладает выраженными токсическими и аллергизирующими свойствами, и хорошо переносится лабораторными животными.
Ключевые слова: Forsecto®, ЛД50, острая токсичность, подострая накожная токсичность, аллергизирующие свойства, крысы, кролики, кровь, гематология, биохимия.
Сокращения: АлАТ — аланинаминотрансфераза, АсАТ — аспартатаминотрансфераза, АТФ — аденозинтрифосфат, ДВ — действующее/ие вещество/а, ЖКТ — желудочно-кишечный тракт, НРДТК — непрямая реакция дегрануляции тучных клеток, ЦНС — центральная нервная система, ЩФ — щелочная фосфатаза, LD50 — lethal dose (полулетальная доза), METI — mitochondrial electron transport inhibitor (ингибитор митохондриального транспорта электронов).
Введение
В современных условиях собаки и кошки стали членами семьи жителей мегаполисов, компаньонами человека в быту и во всех сферах его деятельности, поэтому состояние их здоровья является постоянной заботой владельцев. Особо следует отметить актуальность заболеваний домашних плотоядных, вызываемых эктопаразитами, из которых наиболее распространенные — блохи и иксодовые клещи [5…7], являющиеся векторами возбудителей инвазионных и инфекционных болезней, в том числе зоонозов [1, 2].
Многие исследователи констатируют рост заболеваемости собак и кошек арахноэнтомозами [12…15], объясняя это среди прочего увеличением численности безнадзорных животных в крупных городах и на урбанизированных территориях. Нельзя игнорировать и возможность формирования резистентности у иксодовых клещей и блох к ДВ широко применяемых инсектоакарицидных средств.
Для борьбы с эктопаразитозами мелких домашних животных разработаны различные препаративные формы инсектоакарицидных средств, различающиеся по эффективности [3, 12, 13]. Широко применяемые препараты на основе фипронила не всегда обеспечивают достаточный уровень и длительность защиты животных от иксодовых клещей и блох. В этой связи актуальным остается поиск активных веществ с новым механизмом действия.
Для защиты собак и кошек от эктопаразитов на базе ООО «БиоФерон» (Россия) разработан комбинированный инсектоакарицидный лекарственный препарат для наружного применения Forsecto®, который в качестве активных компонентов содержит этофенпрокс и тебуфенпирад.
При разработке состава препарата во главу угла была поставлена триада — «эффективность, безопасность, удобство применения». Понимание нецелесообразности дальнейшего увеличения дозы фипронила в топикальных инсектоакарицидных препаратах по соображениям безопасности послужило причиной поиска новых ДВ, которые позволили бы многократно усилить воздействие на эктопаразитов при соответствии общепринятым стандартам безопасности для животных-компаньонов. Это обеспечит высокую эффективность и исключит у эктопаразитов резистентность к такому средству.
Успешное решение задачи поиска и выбора новых активных веществ стало возможно благодаря положительным результатам, полученным междисциплинарной командой разработчиков-исследователей на основании результатов многолетних экспериментов по оценке эффективности и безопасности разных вариантов составов комбинированного инсектоакарицидного препарата, итогом которых послужили разработка и вывод на рынок нового препарата для лечения и профилактики эктопаразитозов собак и кошек Forsecto®. Это оригинальный, защищенный патентом ветеринарный лекарственный препарат,содержащий синтетический пиретроид этофенпрокс и уникальное ДВ тебуфенпирад [8]. Новый препарат имеет ряд преимуществ в сравнении с другими инсектоакарицидами, представленными на рынке: уникальный состав обусловливает отсутствие резистентности у эктопаразитов, а наличие нокдаун-эффекта обеспечивает быстрое начало действия и повышает эффективность препарата для предотвращения передачи животному возбудителей векторных инвазий и инфекций.
Тебуфенпирад — новое для ветеринарии ДВ, инсектоакарицид из группы пиразолкарбоксамидов [16] характеризуется:
- уникальным механизмом действия, основанным на ингибировании митохондриальной цепи переноса электронов путем связывания с комплексом I на коферменте Q;
- широким спектром действия в отношении таких эктопаразитов мелких домашних животных, как иксодовые клещи, блохи, вши и власоеды;
- выраженной активностью на любой стадии развития клещей и блох, включая личиночную, эффектом нокдауна и длительным остаточным действием [8];
- умеренной токсичностью, относится к 3 классу опасности: LD50 более 2000 мг/кг (крысы, накожно) [17].
Наличие у тебуфенпирада ово-ларвицидного действия позволяет снизить лекарственную нагрузку на организм целевых животных за счет отсутствия ДВ-регулятора роста и развития членистоногих.
Тебуфенпирад является инсектоакарицидом, обладающим METI-эффектом, т. е. он ингибирует митохондриальный электрон-транспортный комплекс I, препятствуя использованию энергии клетками эктопаразитов. Нарушение активности митохондрий, инициированное тебуфенпирадом, приводит к дефициту АТФ, повышению генерации активных форм кислорода (свободных радикалов) и апоптозу клеток эктопаразитов. Основным триггером, запускающим эти процессы, служит нехватка кислорода и субстратов окисления. Клеточная гипоксия вызывает ряд тяжелых биохимических и метаболических нарушений, опосредующих сбой функциональной активности митохондрий.
Метаболизм клеток переключается с митохондриального окислительного фосфорилирования на анаэробный гликолиз, что приводит к внутриклеточному накоплению лактата и протонов, снижая рН с дальнейшей активацией АТФ-азы, что приводит к быстрому истощению АТФ, перегрузке клетки ионами натрия и кальция. Высокое внутриклеточное содержание кальция в ишемизированной клетке нарушает буферную емкость митохондрий, в связи с чем активируется поступление ионов кальция в митохондриальный матрикс. Это вызывает дисфункцию дыхательной цепи, способствуя гиперпродукции активных форм кислорода и активации механизма гибели клетки (некроз, апоптоз). Также в результате поступления ионов кальция митохондрии «набухают» и разрушаются, высвобождая в цитоплазму соединения, усиливающие степень клеточного повреждения.
Такой механизм действия резко снижает вероятность перекрестной резистентности с другими распространенными пестицидами [18].
Этофенпрокс — синтетический пиретроид III поколения, блокирует проведение нервного импульса в нейронах паразитических членистоногих за счет изменения проницаемости мембран для ионов натрия, что приводит к быстрому парализующему эффекту [18, 19]. ДВ обладает инсектоакарицидной и репеллентной активностью, оказывает нокдаун-эффект, при котором быстро наступает нарушение двигательной функции эктопаразитов с развитием обратимого или летального паралича. Иксодовый клещ или блоха в таком состоянии не могут прикрепиться к животному или удержаться на нем, что позволяет предотвратить передачу трансмиссивных заболеваний.
Таким образом, препарат воздействует комплексно, используя два принципиально разных механизма действия. Этофенпрокс влияет на нервную систему эктопаразитов, нарушая функцию нейронов путем модуляции натриевых каналов. Тебуфенпирад останавливает клеточное дыхание у паразитических членистоногих. В результате воздействие препарата на иксодовых клещей и паразитических насекомых многократно усиливается. Это обеспечивает максимальную эффективность и длительность защитного действия Forsecto® и исключает резистентность к нему у эктопаразитов.
До настоящего времени в ветеринарной практике комбинация этофенпрокса и тебуфенпирада, как в нашей стране, так и за рубежом, не применялась. Поэтому вопросы, связанные с оценкой безопасности и эффективности этого уникального продукта у разных категорий целевых животных, получили свое раскрытие в процессе разработки лекарственного препарата Forsecto® и будут детально рассмотрены в этой и последующих публикациях.
Цель исследования
Поскольку обязательным этапом разработки нового препарата, внедряемого в клиническую ветеринарную практику, является оценка его токсикологических свойств, целью настоящей работы было определение параметров острой пероральной, подострой накожной токсичности, местно-раздражающего, а также аллергизирующего действия лекарственного препарата для ветеринарного применения Forsecto® с использованием стандартных экспериментальных моделей.
Материалы и методы
Токсикологические параметры лекарственного препарата Forsecto® оценивали на лабораторных животных (78 нелинейных крысы, 60 морских свинок и 6 кроликов) в условиях вивария ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный аграрный университет» в соответствии с приказом [9], руководствами [10, 11] и ГОСТ [4].
В экспериментах использовали модификацию препарата для собак, в 1 мл которой содержится 300 мг этофенпрокса, 150 мг тебуфенпирада и вспомогательные компоненты.
Изучение острой пероральной токсичности. После 14-дневного карантина и клинического осмотра (с целью исключить использование в опыте больных животных) были сформированы 7 опытные и 1 контрольная группа белых крыс по 6 особей в каждой группе. Перед началом опыта всех животных содержали на 6-ти часовой голодной диете.
Исследуемый препарат животным опытных групп вводили в желудок без разведения с помощью металлического атравматического зонда в дозах 460,0; 520,0; 580,0; 640,0; 700,0; 760,0 и 820,0 мг/кг.
Животным контрольной группы аналогичным способом вводили физиологический раствор в объеме, равном максимальной дозе образца в опытной группе.
После введения исследуемого лекарственного препарата за животными вели наблюдение в течение 4-х ч, затем с интервалом 1 ч в течение первых 12 ч. Период мониторинга за опытными и контрольными группами составлял 14 суток. Крыс осматривали ежедневно утром и вечером, чтобы оценить внешний вид и поведение, состояние шерстного покрова и видимых слизистых оболочек, прием корма, подвижность, проявление симптомов интоксикации, ее тяжесть, обратимость, сроки возможной гибели.
Для расчета SLD50 и других параметров острой токсичности лекарственного препарата Forsecto® использовали метод пробит-анализа по Литчфилду и Уилкоксону. Классификацию по степени воздействия на организм проводили в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76.
Изучение подострой накожной токсичности. Были сформированы 2 опытные и 1 контрольная группа белых крыс по 10 особей в каждой. Препарат наносили накожно на предварительно выстриженный участок кожи в области спины, ежедневно в течение 5-ти суток в дозах 1/5; 1/10 от LDM50, установленной в остром опыте. Эти дозы в 2 и более раз превышают терапевтические дозы ДВ для собак. В течение всего периода исследования наблюдали за общим состоянием и поведением животных, реакцией на раздражители (звук, свет), проявлением симптомов интоксикации, возможной гибелью. На 1-е, 3-и и 6-е сутки опыта у крыс регистрировали массу тела. На следующие сутки после последнего нанесения (6-е сутки) препарата половину животных из каждой группы подвергали эвтаназии и брали пробы крови для определения гематологических показателей (общеклинический и биохимический анализы крови). Через 10 суток после последнего нанесения вторую половину животных из каждой группы эвтаназировали и брали пробы крови для оценки обратимости возможных токсических эффектов после многократного применения препарата. Статистическую обработку данных проводили методом вариационной статистики по СтьюдентуФишеру с использованием t-критерия.
Изучение местно-раздражающего действия на конъюнктиву. Для опыта была сформирована группа из 6 кроликов. Исследуемый препарат в количестве 1 капли вносили в конъюнктивальный мешок правого глаза кролика однократно. Левый глаз служил контролем, в него вносили стерильный физиологический раствор в количестве 1 капли.
Реакцию учитывали через 15 мин, 1 ч, 24 ч, 48 ч и 72 ч и оценивали по шкале (в баллах):
0 — отсутствие видимой реакции;
1 — легкое покраснение слезного протока;
2 — покраснение слезного протока и склеры в направлении роговицы;
3 — покраснение всей конъюнктивы и склеры, зуд.
Изучение аллергизирующих свойств. Для каждого вида исследования были сформированы 3 опытные и 3 контрольные группы морских свинок по 10 особей в каждой. Подопытных животных сенсибилизировали путем 20 повторных накожных аппликаций исследуемого препарата на выстриженный участок боковой поверхности туловища размером 2×2 см, 5 раз в неделю, в дозе 3 капли на животное. Тестировали животных через 10 суток после сенсибилизации: использовали конъюнктивальную, эпикутанную, назальную пробы, а также тест НРДТК.
Конъюнктивальная проба. 1 каплю препарата вводили под верхнее веко правого глаза, во второй глаз вводили стерильный физраствор. Реакцию учитывали через 15 мин, 24 ч, 48 ч и оценивали в баллах.
0 — отсутствие видимой реакции;
1 — легкое покраснение слёзного протока;
2 — покраснение слезного протока и склеры в направлении роговицы;
3 — покраснение всей конъюнктивы и склеры, зуд, развитие гнойного офтальмита.
Эпикутанная проба. Наносили 3 капли препарата на выстриженный участок кожи размером 2×2 см. Реакцию учитывали сразу после нанесения препарата, а также через 15, 30 мин, 24 и 48 ч.
Назальная проба. 1 каплю препарата вводили в носовые ходы сенсибилизированным и контрольным животным. Оценивали состояние слизистой оболочки: набухание, покраснение, усиление слизеотделения.
Для постановки непрямой реакции дегрануляции тучных клеток (НРДТК) на предварительно окрашенные 0,3%-м спиртовом раствором нейтрального красного предметные стекла наносили по 0,03 мл исследуемой сыворотки крови сенсибилизированных крыс, тучных клеток и тестируемого препарата в разведении 1:100. Реакцию оценивали, как отрицательную, если процент дегранулированных тучных клеток в пробе не превышал 10.
Результаты
Острая пероральная токсичность. Результаты исследования острой пероральной токсичности лекарственного препарата для ветеринарного применения Forsecto® при внутрижелудочном введении крысам представлены в таблице 1. Перед гибелью у животных наблюдали признаки интоксикации: угнетение, диарею, адинамию, судороги, одышку, снижение реакции на внешние раздражители. При вскрытии павших крыс отмечено: увеличение желудка, который был заполнен непереваренными кормовыми массами; тонкий кишечник был наполнен содержимым слизистой консистенции желто-коричневого цвета; сосуды брыжейки и серозных покровов желудка и кишечника инъецированы.
Полученные результаты исследований острой токсичности препарата позволили рассчитать значения летальных доз при внутрижелудочном введении препарата лабораторным животным, что продемонстрировано в таблице 2. LD16 и LD84 рассчитывали путем построения пробитного графика, где сопоставлены дозы эффекта и соответствующие пробиты, что отображено на рисунке 1.
Таблица 1. Расчет LD50 лекарственного препарата для ветеринарного применения Forsecto® методом Миллера и Тейнтера
| № группы | Дозировка, мг/кг | Число животных | Гибель, % | Пробиты | |
| павших | павших | ||||
| 1 | 460,0 | 0 | 6 | 6 | 3,27 |
| 2 | 520,0 | 1 | 5 | 16,7 | 4,03 |
| 3 | 580,0 | 2 | 4 | 33,3 | 4,47 |
| 4 | 640,0 | 3 | 3 | 50,0 | 5,0 |
| 5 | 700 | 4 | 2 | 66,7 | 5,43 |
| 6 | 760,0 | 5 | 1 | 83,3 | 5,97 |
| 7 | 820 | 6 | 0 | 100,0 | 6,73 |
| Контроль | 5 мл/гол | 0 | 6 | 0 | - |
Таблица 2. Параметры острой пероральной токсичности лекарственного препарата для ветеринарного применения Forsecto® на белых крысах, мг/кг
| LD0 | LD16 | LD50 | LD84 | LD100 | SLD50 |
| 460,0 | 517,63 | 640,0 | 762,3 | 820,0 | 5,83 |
Рис. 1. Параметры острой пероральной токсичности Forsecto
Показатель ошибки средней дозы эффекта SLD50 рассчитали по следующей формуле: SLD50 = (LD84 — LD16) / 2n, где LD16 и LD84 — дозы эффекта, мг/кг; n — суммарное число животных в группах, для которых значения пробитов находятся в пределах 3,5…6,5; SLD50 при расчете острой токсичности составила 5,83 мг/кг
Таким образом, LD50 лекарственного препарата для ветеринарного применения Forsecto® составляет 640 мг/кг, что, согласно ГОСТ 12.1.007-76, позволяет отнести его к III классу опасности «Вещества умеренно опасные».
Подострая накожная токсичность. При изучении подострой накожной токсичности лекарственного препарата Forsecto® на крысах установлено, что его многократное накожное применение во всех испытанных дозах не вызывает значимых изменений в клиническом состоянии белых крыс. Поведенческие реакции, поедание корма и потребление воды, частота дыхания у всех животных опытных групп оставались в пределах нормы и не отличались от контроля. За период наблюдения у крыс, находящихся в опыте, не было выявлено расстройств пищеварения и мочеотделения. Случаев летального исхода среди животных в ходе опыта не было. Животные охотно поедали корм, равномерно прибавляли в массе тела. Статистически значимых различий по данному показателю в ходе опыта не отмечено. Не выявлено зависимости от уровня дозирования препарата (табл. 3).
При оценке влияния исследуемого препарата на функциональное состояние центральной нервной системы отмечено, что во время накожного нанесения его разных доз крысы сохраняли двигательную активность, сопоставимую с активностью контрольных животных. Подопытные крысы адекватно реагировали на внешние раздражители.
Результаты анализа периферической крови крыс после многократного накожного применения лекарственного препарата Forsecto® показали, что количество эритроцитов, лейкоцитов и лейкограмма в испытуемом диапазоне доз существенно не изменялись и варьировались в пределах контрольных величин (табл. 4). Все незначительные изменения, обнаруженные в гематологической картине подопытных крыс, соответствовали референтным значениям. Следует подчеркнуть, что исследуемый препарат во всех испытанных дозах не оказывал влияния на содержание эозинофилов, что может служить косвенным доказательством отсутствия аллергизирующего действия.
Таблица 3. Динамика прироста массы тела белых крыс после многократного накожного применения лекарственного препарата Forsecto®
| Группа животных, доза препарата | 1-е сутки | Масса животного, г3-и сутки | 7-е сутки |
| Контроль | 197,1±4,85 | 198,2±4,82 | 201,2±5,07 |
| 1/5 LD50 | 195,7±3,47 | 196,3±4,02 | 199,8±4,12 |
| 1/10 LD50 | 198,4±5,46 | 200,4±5,55 | 204,5±5,71 |
Примечание: р≤0,05 — разница статистически значима в сравнении с показателями контрольной группы
Таблица 4. Влияние лекарственного препарата Forsecto® на гематологические показатели белых крыс после многократного накожного применения
| Показатели | Группы животных, доза, мл/гол | ||
| Контроль | 1/5 LD50 | 1/10 LD50 | |
| Через сутки после последнего введения | |||
| Эритроциты, 1012sup>/л | 7,41±0,12 | 7,86±0,25 | 7,83±0,86 |
| Средний объем эритроцита (MCV), мкм3 | 53,2±0,54 | 54,6±0,67 | 54,7±0,25 |
| Среднее содержание гемоглобина в эритроците (MCH), пг | 18,1±0,56 | 19,3±0,35 | 20,2±0,75 |
| Средняя концентрация гемоглобина в эритроците (MCHC), г/дл | 34,6±0,08 | 34,2±0,86 | 34,9±0,46 |
| Гемоглобин, г/л | 132,3±2,75 | 137,3±2,76 | 134,6±3,75 |
| Гематокрит, % | 41,2±0,54 | 43,7±0,35 | 42,4±0,35 |
| Тромбоциты, 109/л | 651,5±20,1 | 653,4±12,6 | 663,6±16,5 |
| Лейкоциты, 109/л | 7,75±0,78 | 7,76±0,73 | 7,92±0,65 |
| Лейкограмма, %: Нейтрофилы: юные палочкоядерные сегментоядерные Базофилы Эозинофилы Моноциты Лимфоциты |
0 0,34±0,53 17,3±0,76 0 2,35±0,86 2,44±0,45 83,5±1,65 |
0 0,75±0,75 13,4±0,45 0 2,32±0,64 2,26±0,56 75,3±1,87 |
0 0,35±0,75 12,5±0,75 0 2,26±0,26 2,24±0,04 78,2±1,37 |
| Через 10 суток после последнего введения | |||
| Эритроциты, 1012/л | 7,43±0,64 | 7,75±0,24 | 7,89±0,24 |
| Средний объем эритроцита (MCV), мкм3 | 52,6±0,56 | 51,2±0,76 | 56,6±0,24 |
| Среднее содержание гемоглобина в эритроците (MCH), пг | 15,2±0,76 | 19,9±0,76 | 18,6±0,36 |
| Средняя концентрация гемоглобина в эритроците (MCHC), г/дл | 31,3±0,56 | 34,8±0,35 | 34,4±0,86 |
| Гемоглобин, г/л | 132,4±2,65 | 124,2±5,04 | 134,9±1,76 |
| Гематокрит, % | 45,3±0,48 | 45,8±1,74 | 44,1±0,75 |
| Тромбоциты, 109/л | 662,4±43,5 | 646,5±23,5 | 664,3±21,1 |
| Лейкоциты, 109/л | 6,45±0,62 | 7,64±0,75 | 7,75±0,24 |
| Лейкограмма, %: Нейтрофилы:M юные палочкоядерные сегментоядерные Базофилы Эозинофилы Моноциты Лимфоциты |
0 0,45±0,65 12,5±1,45 0 3,45±0,67 2,64±0,74 82,6±1,69 |
0 0,65±0,62 13,6±1,75 0 2,72±0,85 2,36±0,36 79,1±1,99 |
0 0,54±0,63 13,5±1,74 0 2,63±0,74 2,26±0,66 78,7±1,25 |
Примечание: р≤0,05 — разница статистически значима в сравнении с показателями контрольной группы
Таблица 5. Влияние лекарственного препарата Forsecto® на биохимические показатели крови белых крыс после многократного накожного применения
| Показатели | Группы животных, доза | ||
| Контроль | 1/5 LD50 | 1/10 LD50 | |
| Через сутки после последнего введения | |||
| Общий белок, г/л | 65,2±1,65 | 64,2±1,65 | 65,2±1,75 |
|
Белковые фракции, г/л Альбумины Глобулины: - α - β - γ |
36,6±1,25 8,43±0,84 7,54±0,37 8,46±0,35 |
36,7±1,26 8,36±0,85 7,24±0,74 8,24±0,25 |
34,6±1,76 8,37±0,87 7,26±0,74 8,35±0,36 |
| АсАТ, Е/л | 132,5±12,4 | 137,2±14,6 | 136,6±13,6 |
| АлАТ, Е/л | 35,6±2,35 | 35,3±1,47 | 36,4±1,94 |
| ЩФ, Е/л | 86,6±2,67 | 82,7±2,86 | 87,2±3,74 |
| Гамма ГТ, Е/л | 1,56±0,35 | 1,86±0,38 | 1,38±0,53 |
| Мочевина, мМ/л | 7,46±0,35 | 6,38±0,24 | 6,64±0,75 |
| Креатинин, мкМ/л | 36,3±1,35 | 34,5±1,24 | 35,3±1,26 |
| Холестерин, мМ/л | 2,43±0,26 | 2,75±0,36 | 2,46±0,25 |
| Общие липиды, г/л | 1,75±0,36 | 1,33±0,65 | 1,77±0,25 |
| Глюкоза, мМ/л | 4,65±0,35 | 4,36±0,26 | 4,64±0,97 |
| Фосфор неорг., мМ/л | 1,97±0,24 | 1,97±0,23 | 1,96±0,89 |
| Кальций, мМ/л | 2,85±0,43 | 2,53±0,65 | 2,34±0,76 |
|
Через 10 суток после последнего введения |
|||
| Общий белок, г/л | 57,5±1,35 | 57,4±1,24 | 58,4±1,61 |
| Белковые фракции, г/л Альбумины | 36,4±1,24 | 37,4±2,25 | 36,7±1,26 |
|
Глобулины - α - β - γ |
7,42±0,65 7,74±0,24 8,34±0,87 |
7,36±0,75 7,65±0,24 7,64±0,65 |
6,99±1,24 6,75±0,24 7,31±0,64 |
| АсАТ, Е/л | 137,3±13,6 | 133,5±9,65 | 131,5±12,5 |
| АлАТ, Е/л | 38,5±2,65 | 39,6±4,56 | 42,6±3,36 |
| ЩФ, Е/л | 107,4±2,54 | 103,4±8,77 | 104,5±3,96 |
| Гамма ГТ, Е/л | 1,54±0,75 | 1,34±0,87 | 1,69±0,36 |
| Мочевина, мМ/л | 6,97±0,46 | 6,89±0,47 | 6,46±0,37 |
| Креатинин, мкМ/л | 37,7±1,35 | 36,3±1,86 | 37,3±2,21 |
| Холестерин, мМ/л | 2,76±0,35 | 2,76±0,47 | 2,86±0,48 |
| Общие липиды, г/л | 2,34±0,56 | 2,45±0,35 | 2,65±0,56 |
| Глюкоза, мМ/л | 4,35±0,36 | 4,74±0,64 | 4,46±0,85 |
| Фосфор неорг., мМ/л | 2,05±0,86 | 2,03±0,35 | 2,04±0,75 |
| Кальций, мМ/л | 2,75±0,35 | 2,35±0,76 | 2,86±0,36 |
Примечание: р≤0,05 — разница статистически значима в сравнении с показателями контрольной группы
Таблица 6. Влияние лекарственного препарата Forsecto® на массу внутренних органов белых крыс после многократного накожного применения
| Орган | Группы животных, доза | ||
| Контроль | 1/5 LD50 | 1/10 LD50 | |
| Через 1 сутки после последнего введения | |||
| Печень | 26,4±0,25 | 26,4±0,27 | 23,6±0,25 |
| Почки | 5,56±0,53 | 6,72±0,54 | 5,24±0,24 |
| Легкие | 3,24±0,24 | 3,24±0,55 | 3,24±0,24 |
| Селезенка | 2,25±0,45 | 2,24±0,58 | 2,65±0,38 |
| Сердце | 2,84±0,27 | 2,27±0,85 | 2,47±0,26 |
| Через 10 суток после последнего введения | |||
| Печень | 29,4±0,27 | 28,5±0,56 | 29,3±0,74 |
| Почки | 6,44±0,49 | 6,02±0,51 | 5,75±0,36 |
| Легкие | 3,73±0,25 | 3,75±0,26 | 3,73±0,98 |
| Селезенка | 2,74±0,37 | 2,73±0,64 | 2,63±0,75 |
| Сердце | 3,76±0,25 | 2,75±0,83 | 2,94±0,73 |
Примечание: р≤0,05 — разница статистически значима в сравнении с показателями контрольной группы
Как видно из данных биохимических показателей крови, у крыс опытных групп не отмечено статистически значимых изменений при сопоставлении с аналогичными показателями у контрольных животных (табл. 5). Не выявлено патологических сдвигов в значениях показателей, характеризующих белоксинтезирующую функцию печени — концентрации общего белка и альбумина. Уровень ферментемии, обеих аминотрансфераз претерпевал незначительные колебания в диапазоне, принимаемом за условную норму для данного вида животных, что подтверждает отсутствие активации процессов цитолиза. Таким образом, можно прийти к выводу, что лекарственный препарат Forsecto® в испытуемом диапазоне доз не оказывает отрицательного воздействия на функциональное состояние печени.
Содержание мочевины и креатинина в сыворотке крови у подопытных крыс после длительного нанесения разных доз исследуемого препарата не изменялось по сравнению с контрольными величинами.
По результатам макроскопического исследования органов подопытных крыс, проведенного после патологоанатомического вскрытия животных на 6-й и 15-й день от начала эксперимента, сколько-нибудь значимых изменений в их состоянии не выявлено.
Результаты морфометрического анализа свидетельствуют об отсутствии статистически значимых различий в относительной массе внутренних органов у крыс после многократного применения лекарственного препарата Forsecto® в изученных дозах по сравнению с аналогичными показателями у контрольных животных (табл. 6).
Таким образом, многократное накожное применение Forsecto® во всех испытанных дозах не вызывает значимых изменений в клиническом состоянии белых крыс. Все изменения, обнаруженные в общеклинической и биохимической картине крови подопытных животных, соответствовали физиологической норме. Не установлено негативного воздействия исследуемого препарата на основные физиологические функции организма, отсутствуют патоморфологические изменения, что подтверждает его хорошую переносимость.
Местно-раздражающее действие на конъюнктиву. При визуальной оценке состояния конъюнктивы, роговицы и век подопытных животных установлено,что лекарственный препарат Forsecto® через 15 мин после нанесения вызывал раздражение слезного протока, выраженное в его гиперемии, а через 1 ч — покраснение слезного протока и склеры в направлении роговицы. При изучении влияния препарата на конъюнктиву кролика через 24 ч регистрировали покраснение всей конъюнктивы и склеры, зуд, отек в области глазного яблока, обильное слезотечение, данная картина сохранялась на протяжении всего исследования (табл. 7, рис. 1). Других нежелательных реакций не зарегистрировано.
Таблица 7. Влияние лекарственного препарата Forsecto® на массу внутренних органов белых крыс после многократного накожного применения
| Время учета реакции | Реакция, баллы |
| 15 мин | 1 |
| 1 ч | 2 |
| 24 ч | 3 |
| 48 ч | 3 |
| 72 ч | 3 |
Рис. 1. Глаз кролика после инстилляции лекарственного препарата Forsecto®
Таблица 8. Конъюнктивальная проба морских свинок после инстилляции лекарственного препарата Forsecto®
| Группа | Реакция конъюнктивы, баллы | ||
| 15 мин | 24 ч | 48 ч | |
| Forsecto® | 0 | 0 | 0 |
| Контроль | 0 | 0 | 0 |
Таблица 9. Эпикутанная проба. Показатели аллергизирующего действия лекарственного препарата Forsecto® на морских свинках
| Группа | Наблюдаемые симптомы | ||
| гиперемия | отек кожи | десквамация | |
| Forsecto® | 0 | 0 | 0 |
| Контроль | 0 | 0 | 0 |
Таким образом, лекарственный препарат для ветеринарного применения Forsecto® обладает местнораздражающим действием на конъюнктиву.
Аллергизирующие свойства. Использовали конъюнктивальную, эпикутанную, назальную пробы, а также тест НРДТК.
Конъюнктивальная проба. При визуальной оценке состояния конъюнктивы, роговицы и век глаз морских свинок установлено, что исследуемый препарат не вызывает изменений конъюнктивы, как сразу после инстилляции, так и на протяжении всего опыта (табл. 8, рис. 2).
Таким образом, по результатам конъюнктивальной пробы исследуемый препарат не обладает аллергизирующим действием. Отсутствие местнораздражающего действия препарата на конъюнктиву морских свинок, в отличие от кроликов, объясняется известной для последних высокой видовой чувствительностью к тем или иным ДВ, входящим в состав топикальных форм инсектоакарицидов.
Рис. 2. Конъюнктивальная проба. Глаз морской свинки через 15 мин, 24 и 48 ч после инстилляции лекарственного препарата Forsecto®
Рис. 3. Эпикутанная проба. Показатели аллергизирующего действия лекарственного препарата Forsecto® на морских свинках
Рис. 4. Внешний вид (результат) воздействия лекарственного препарата Forsecto® при постановке назальной пробы морской свинке
Таблица 10. Результаты реакции непрямой дегрануляции тучных клеток крыс, %
| Сутки | Группа | |
| опыт | контроль | |
| 10-е | 5,64±0,75 | 6,07±0,49 |
| 15-е | 5,25±0,90 | 6,53±0,88 |
| 30-е | 7,63±1,04 | 6,77±1,31 |
Примечание. р≤0,05 — разница статистически значима в сравнении с показателями контрольной группы.
Эпикутанная проба. В результате опыта по изучению аллергенного действия лекарственного препарата Forsecto® у животных не выявлено признаков эритемы, отека и других патологических изменений кожного покрова, температура тела в месте нанесения препарата не изменялась. Участки кожи после стрижки одинаково быстро заросли молодой шерстью, не отличающейся по густоте от остальной, как у опытной, так и контрольной группы животных. Не выявлено изменений поведения и аппетита животных. Толщина кожной складки на выстриженных участках у животных опытных групп не отличалась от таковой у контрольных животных. В течение эксперимента состояние кожи не изменялось (отсутствие реакции), признаков гиперемии и других изменений состояния кожных покровов визуально не отмечалось (табл. 9, рис. 3).
Назальная проба. В результате постановки назальной пробы у животных не выявлено признаков набухания, покраснения слизистой оболочки, усиления слизеотделения и других патологических изменений (рис. 4).
Реакция непрямой дегрануляции тучных клеток. В связи с тем, что процент дегранулированных тучных клеток в опытных группах ≺10 %, НРДТК является отрицательной (табл. 10). Исследование сывороток крови опытных морских свинок, после их сенсибилизации, показало отсутствие аллергизации организма подопытных животных.
Таким образом, лекарственный препарат Forsecto® не вызывает сенсибилизацию и повреждающего действия на конъюнктиву и слизистые оболочки морских свинок, как сразу после инстилляции, так и на протяжении всего опыта, не проявляет аллергенного действия на кожные покровы при многократном применении и не вызывает дегрануляции тучных клеток, выходящей за пределы нормы.
Заключение
Специалистами ООО «БиоФерон» (Россия) разработан новый оригинальный топикальный инсектоакарицид для ветеринарного применения Forsecto®, в качестве ДВ содержащий этофенпрокс — синтетический пиретроид III поколения и тебуфенпирад — ингибитор митохондриального окислительного фосфорилирования у членистоногих. Препарат применяют собакам и кошкам для борьбы с иксодовыми клещами, блохами, вшами, власоедами и комарами. Он также предотвращает нападение эктопаразитов на животных.
LD50 Forsecto® при внутрижелудочном введении крысам составляет 640 мг/кг, что согласно ГОСТ 12.1.007-76 позволяет отнести его к III классу опасности «Вещества умеренно опасные».
Многократное накожное применение лекарственного препарата Forsecto® во всех испытанных дозах не вызывает значимых изменений в клиническом состоянии белых крыс. Не установлено негативного воздействия препарата в повышенных дозах на основные физиологические функции биологических тест-систем, а также не зарегистрировано патоморфологических изменений, что подтверждает хорошую переносимость препарата лабораторными животными.
Forsecto® не вызывает сенсибилизации и повреждающего действия на конъюнктиву глаза и слизистые оболочки морских свинок, как сразу после инстилляции, так и на протяжении всего опыта, не проявляет аллергизирующего действия на кожные покровы при многократном применении и не вызывает дегрануляции тучных клеток крыс, выходящей за пределы нормы. Выявлено местно-раздражающее действие препарата на конъюнктиву кроликов. Исследуемый препарат в дозах, превышающих терапевтические для целевых видов животных, не оказывал влияния на содержание эозинофилов у крыс, что может служить дополнительным доказательством отсутствия у него аллергенных свойств.
От других топикальных инсектоакарицидов, представленных на рынке, Forsecto® отличается уникальным составом, который за счет сочетания разнонаправленных механизмов действия ДВ многократно усиливает его воздействие на паразитических клещей и насекомых, а учитывая, что тебуфенпирад является METI-ингибитором, обеспечивает максимальную эффективность защитного действия препарата и исключает резистентность к нему у эктопаразитов.
Конфликт интересов
Разработчиком препарата и спонсором исследования является ООО «БиоФерон» (Россия).
Библиография
1. Балашов, Ю. С. Иксодовые клещи паразиты и переносчики инфекций / Ю. С. Балашов. — С.-Пб: Наука, 1998. 287 с.
2. Балашов, Ю. С. Кровососущие клещи (Ixodoidea) — переносчики болезней человека и животных / Ю. С. Балашов. — Л: Наука, 1967. — 320 с.
3. Глазунова, Л. А., Сравнительная эффективность препаратов при блошиной инвазии собак и кошек / Л. А. Глазунова, Ю. А. Ткачёва // Ветеринарный врач. — 2017. — № 5. — С. 44-48.
4. ГОСТ 12.1.007-76. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности — введ. 01.01.77. — М., 1976.
5. Закусимова, К. С. Распространение и методы борьбы с эктопаразитами плотоядных животных / К. С. Закусимова, А. В. Семенко // Научный вестник. Серия: Ветеринарная медицина, качество и сохранность продукции животноводства. — 2018. — № 293. — С. 167-174.
6. Зубарева, И. М. Эпизоотологическая характеристика эктопаразитозов плотоядных животных мегаполиса (на примере Новосибирска) / И. М. Зубарева, Н. В. Юдина, Е. А. Ефремова // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями. — 2023. — № 24. — С. 184-188.
7. Кербабаев, Э. Б. Основы ветеринарной акарологии. Методы и средства борьбы с клещами / Э. Б. Кербабаев // Труды Всерос. ин-та гельминтологии им. К.И. Скрябина. — 1998. — Том 34. — 220 с.
8. Патент RU 2804368C1. Комбинированное инсектоакарицидное средство для защиты мелких домашних животных от эктопаразитов. Владелец патента: Общество с ограниченной ответственностью «БиоФерон». Авторы: Орхан Ахмед оглы Зейналов, Любовь Михайловна Кокорина. Начало действия: 2023.09.28. Публикация: 2023.09.28. Подача: 2023.03.02
9. Приказ Министерства сельского хозяйства РФ №101 от 06.03.2018 г. «Об утверждении Правил проведения доклинического исследования лекарственного средства для ветеринарного применения, клинического исследования лекарственного препарата для ветеринарного применения, исследования биоэквивалентности лекарственного препарата для ветеринарного применения». Зарегистрирован в Минюсте России 05.06.2018 № 51296.
10. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / Миронов А. Н., Бунатян Н. Д. и др. — М.: Гриф и К, 2012. — 944 с.
11. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р. У. Хабриева. — М.: Медицина, 2005. — 832 с.
12. Ткачева, Ю. А. Мониторинг эктопаразитозов собак и кошек на юге Тюменской области и совершенствование противопаразитарных мероприятий / Ю. А. Ткачева: дисс. ... канд. вет. наук: 03.02.11. [Место защиты: ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»], 2020.
13. Храпай, В. А. Паразитофауна домашних и диких плотоядных животных Юга России и меры борьбы с основными паразитозами / В. А. Храпай: дисс. ... канд. вет. наук. — Москва, 2013. — 144 с.
14. Шадыева, Л. А. Эпизоотологические особенности ктеноцефалидозов кошек в г. Ульяновске / Л. А. Шадыева, Е. М. Романова, С. Г. Кармаева // Вестник Ульяновской ГСХА. — 2020. — №1 (49). — С. 96-102.
15. Шустрова, М. В. Распространение акарозов у собак в г. Волжский / М. В. Шустрова, Л. В. Бычкова, О. Н. Нечаева // Энтомологические и паразитологические исследования в Поволжье. — 2003. — № 2. — С. 105-112.
16. Background document to the Opinion proposing harmonised classification and labelling at EU level of Tebufenpyrad. Annex 1 [Электронный ресурс]. — URL (дата обращения 14.10.2024).
17. EFSA Scientific Report 192, 1-99 Conclusion on the peer review of tebufenpyrad, 2008 [Электронный ресурс]. — URL (дата обращения 14. 10.2024).
18. IRAC Mode of Action Classification. Insecticide Resistance Action Committee [Электронный ресурс]. — URL (дата обращения 14.10.2024)
19. Khambay, B. P. S. Pyrethroids / B. P. S. Khambay, P. J. Jewess // Comprehensive Molecular Insect Science, 2005. — pp. 1-29. doi:10.1016/b0-44-451924-6/00075-2.
Оцените статью
Поделиться
